English
+38 068 889 89 89
00380689869898 (汉语)
00380930552240 (باللغة العربية)
00380930552240 (باللغة العربية)
+38 044 223 28 95
Contact us

Our licences

Применение гемопоэтических клеток эмбриональной печени человека при лечении больных раком головки поджелудочной железы, осложненным механической желтухой

А.И. Смикодуб
Клиника клеточной терапии
Национального медицинского университета и Центра эмбриональных тканей «ЭмСелл», г. Киев.


Эмбриональные клеточные суспензии, содержащие стволовые клетки, применяются в последние десятилетия в терапии различных заболеваний благодаря своей способности восстанавливать клеточную массу и функциональную активность поврежденной ткани или органа. В качестве источника стволовых клеток гемопоэза используют обычно эмбриональную печень в возрасте 5-8 недель и эмбриональную селезенку 6-8 недель гестации.

Развитие рака головки поджелудочной железы с обструкцией желчных путей сопровождается выраженной депрессией кроветворной функции и иммунитета в результате токсического действия опухоли, интоксикации желчными кислотами, пигментами, а также угнетения функции печени. Частично эти явления уменьшаются в результате проведенного паллиативного хирургического лечения и детоксикационной терапии. При назначении химиотерапии угнетение гемопоэза и факторов иммунитета становится еще более выраженным и сопровождается миелодепрессией в виде глубокой лейкопении, агранулоцитоза, тромбоцитопении, что делает невозможным дальнейшее лечение цитостатическими препаратами. Иммунологическая несостоятельность приводит к развитию инфекционных осложнений. Кроме того, резко ухудшается качество жизни ввиду нарастания явлений интоксикации. Пациенты слабеют, худеют, постоянно находятся в постели, усиливаются явления соматической депрессии.

У нас имеется опыт использования гемопоэтических клеток эмбриональной печени человека (ГК ЭПЧ) в программах лечения онкологических больных на разных этапах развития онкологического процесса. Гемопоэтические клетки помогают провести радикальное лечение опухоли при наличии осложнений в виде анемии, лихорадки, истощения. После проведенных трансплантаций эти явления уменьшаются или исчезают. Эмбриональные клеточные суспензии, содержащие стволовые клетки гемопоэза, позволяют реконструировать гемопоэз после развития цитостатической миелодепрессии в ходе последующих курсов химиотерапии. Наконец, гемопоэтические клетки способны восстановить показатели иммунитета у пациентов, получивших курсы химиотерапии [4].

Уже через 6-8 часов после трансплантации у пациентов наблюдается синдром раннего посттрансплантационного улучшения в виде уменьшения слабости, снижения температуры, улучшения аппетита, повышения физической и умственной активности, изменения психофункционального статуса [3].

Материалы и методы. Эмбрионы 5-8 недель гестации получали в ходе медицинских абортов по социальным показаниям от здоровых женщин, предварительно обследованных на наличие вирусных и гемических инфекций. Клеточные суспензии из эмбриональной печени готовили в стерильных условиях бокса по стандартной методике, включающей следующие этапы: выделение эмбриональной печени, гомогенизация, фильтрация через фильтры для переливания крови и иглы уменьшающегося диаметра. Контейнеры с суспензией замораживали по программе и хранили при температуре -196°С.

Пренатальная диагностика включала в себя исследования на наличие сифилиса, ВИЧ-инфекции, вирусного гепатита В и С. Проводили исследования содержимого контейнеров на бактериальную стерильность. Фетальная диагностика включала исследования на наличие ВИЧ-инфекции, вирусного гепатита В и С, цитомегаловируса, вируса краснухи, герпеса и токсоплазмоза. Кровь доноров исследовалась также на ВИЧ-инфекцию через 90 дней после прерывания беременности.Ґ

Для трансплантации отбирали клеточные суспензии 5-8 недель гестации, с количеством клеток от 5 до 90?106 в 1 мл, в объеме от 1 до 4,5 мл. Клеточную суспензию размораживали по программе и вводили внутривенно капельно [1].

Исследование субпопуляционного состава иммунокомпетентных клеток проводились при помощи непрямого иммунофлюоресцентного теста с панелями моноклональных антител серии Ley (Becton Dickinson, США), выявляющих поверхностные антигены кластеров CD3, CD4, CD8, CD16 и CD22. Исследования проводили на лазерном проточном цитофлюориметре Facstar Plus (Becton Dickinson, США). Обработка данных проводилась по программе «Facstar Plus».

Под наблюдением находилось 22 больных с раком головки поджелудочной железы, осложненным механической желтухой, которым была проведена операция билиодигестивного шунтирования с целью устранения холестаза. Средний возраст оперированных больных составил 65,1±3,3 года. Мужчин среди страдавших раком головки поджелудочной железы было в 1,8 раза больше, чем женщин. В первую группу вошли 12 пациентов с раком головки поджелудочной железы, после паллиативного хирургического лечения через 9-17 дней получивших базисную химиотерапию 5-фторурацилом и адриобластином. Во вторую группу вошли 10 пациентов, которым после хирургического лечения и курса химиотерапии через 8-14 дней была проведена трансплантация ГК ЭПЧ ввиду снижения одного из показателей периферической крови: лейкоцитов менее 4,0 Г/л, эритроцитов менее 3,0 Т/л, тромбоцитов менее 180 Г/л.

В качестве контрольных показателей использовались данные обследования группы из 11 грыженосителей в возрасте 57-69 лет.

Результаты и их обсуждение.
Перед операцией в 1-ой и 2-ой группе больных наблюдали достоверное снижение по сравнению с контрольной группой следующих показателей (табл. 1 и 2, рис. 1): эритроцитов на 26% и 32%, гемоглобина на 15% и 12%, лейкоцитов на 19% и 30%, тромбоцитов на 23% и 30%, общего числа лимфоцитов на 18% (p>0,05) и 28%, Т-лимфоцитов (CD3+) на 31% и 40%, Т-хелперов (CD4+) на 6% (p>0,05) и 40%, Т-супрессоров (CD8+) на 40% и 69%, ЕК-клетки (CD16+) на 58% и 54%, соответственно. Иммунорегуляторный индекс после операции у пациентов 2 группы возрос до 3,01±0,24 (в 1,9 раза).
После операции постоянно проводилась терапия, направленная на уменьшение явлений воспаления, интоксикации, восстановления функции печени и желчевыводящих путей. У пациентов уменьшились явления желтушного синдрома и печеночно-клеточной недостаточности, исчезли признаки холемического синдрома.

Перед проведением курса химиотерапи в обеих группах отмечено статистически достоверное снижение эритроцитов в 1-ой группе на 19%, во 2-ой - на 27%, гемоглобина - соответственно на 26% и 24%, лейкоцитов - на 17% и 27%, тромбоцитов - на 24% и 32%, лимфоцитов - на 23% и 30%, Т-лимфоцитов - на 28% и 35%, Т-хелперов (CD4+) на 16% и 43%, Т-супрессоров (CD8+) в 3 раза и 3,7 раза соответственно. Таким образом, перед проведением курса химиотерапии основные показатели периферической крови и иммунологического статуса возросли на 10-20% кроме субпопуляции Т-супрессоров.

Пациенты обеих групп получили базисное химиотерапевтическое лечение 5-фторурацилом, внутривенно по 15 мг/кг массы тела до суммарной дозы 4,0 грамма и адриобластином, внутривенно по 50 мг/м2 поверхности тела в первый день каждого курса лечения. И в 1-ой и во 2-ой группах показатели периферической крови и клеточного иммунитета снизились в пределах от 10% до 40%. Так, например, количество лейкоцитов составило в 1-ой группе 2,84±0,24 Г/л, во 2-ой группе - 2,66±0,65 Г/л, эритроцитов - в 1-ой группе - 2,7±0,28 Т/л, во 2-ой - 2,31±0,25 Т/л, тромбоцитов в 1-ой группе 134,2±11,1 Г/л, во 2-ой группе - 118,1±12,9 Г/л. Продолжение курсов химиотерапии стало невозможным ввиду явлений цитостатической депрессии. 10 больным была проведена трансплантация ГК ЭПЧ.

В дальнейшем анализировались показатели периферической крови и иммунологического статуса через 1, 3, 6 и 9 месяцев после проведения первого курса химиотерапии. Пациентам 1-ой группы курсы химиотерапии более не проводились (наблюдения 1993-2001 г.). Пациентам 2-ой группы были проведены повторные курсы химиотерапии от 2 до 4 (наблюдения 1998-2001 г.).

Через 1 месяц у пациентов 2-ой группы количество лейкоцитов было выше на 63%, эритроцитов - на 18%, тромбоцитов - на 13%, общее количество лимфоцитов - на 77%, количество лимфоцитов CD3+ на 69%, лимфоцитов CD4+ - уменьшилось на 5%, CD8+ - возросло на 67%, CD22+ - на 33%, ЕК-клеток - в 5,4 раза по сравнению с аналогичными показателями у пациентов в 1-й группе.

Через 3 месяца, несмотря на проведение последующего курса химиотерапии, у больных 2-й группы определяемые показатели оказались выше по сравнению с аналогичными в 1-ой группе: лейкоцитов было на 29% выше, эритроцитов - на 20%, тромбоцитов - на 5%, общее количество лимфоцитов - на 25%, количество лимфоцитов CD3+ - на 25%, лимфоцитов CD4+ - меньше на 40%, количество CD8+ - возросло на 21%, CD22+ - на 28%, ЕК-клеток стало в 4 раза больше по сравнению с аналогичными показателями у пациентов в 1-й группе

Через 6 месяцев тенденция более высоких показателей красной и белой крови, тромбоцитов и показателей иммунитета сохранилась у больных, получивших трансплантацию ГК ЭПЧ. Эти показатели были настолько стабильные, что удалось провести третий курс химиотерапии.

Продолжительность жизни пациентов 1-ой группы составила 6,9±0,52 месяцев, поэтому в срок 9 месяцев оценивались показатели только у больных 2-ой группы. У них наблюдали лейкопению (3,09±0,49 Г/л), анемию средней степени тяжести (эритроциты 2,85±0,31 Т/л, гемоглобин 108,1±13 г/л), тромбоцитопению (124±8,7 Г/л), лимфопению (1,08±0,12 Г/л), снижение субпопуляций лимфоцитов CD3+, CD4+, CD8+, CD22+, CD16+ до крайне низких показателей. Продолжительность жизни пациентов 2-ой группы составила 10,1±0,56 мес.

Выводы:
  1. Трансплантация ГК ЭПЧ при лечении больных раком головки поджелудочной железы, осложненным механической желтухой, позволяет частично восстановить показатели периферической крови: лейкоциты, эритроциты, тромбоциты. Кроме этого, улучшаются показатели клеточного иммунитета, возрастает общее количество лимфоцитов, а также их субпопуляций (CD3+, CD4+, CD8+, CD16+), нормализуется иммунорегуляторный индекс.
  2. Применение ГК ЭПЧ позволяет провести планируемые курсы химиотерапии в полном объеме, что связано с появлением резистентности костного мозга к цитостатическим препаратам после введения эмбриональных стволовых клеток.
  3. Применение ГК ЭПЧ в комплексном лечении больных раком головки поджелудочной железы, осложненным механической желтухой, включающем паллиативную операцию и курсы химиотерапии позволяет увеличить продолжительность жизни почти в 1,5 раза.

Таблица 1.

Гематологические и иммунологические показатели у больных 1-ой группы, которые прошли хирургическое лечение и химиотерапию.

Показатели Эритро-
циты
Гемо-
глобин
Рети-
куло-
циты
Тромбо-
циты
Лейко-
циты
Лимфо-
циты
Т-лимфо-
циты, CD3+
Т-хелперы, CD4+ Т-супрес-
соры, CD8+
CD4+/ CD8+ B-лимфо-
циты, CD22+
EK-клетки, CD 16+
  n   1012 г/л % 109 109 109 109 % 109 % 109 %   109 % 109 %
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17
Контроль 11 M 3,54 137 0,83 217 5,42 1,81 1,24 57,8 0,81 40,3 0,52 25,0 1,59 0,23 9,1 0,24 13,9
±m 0,32 7,30 0,07 13,1 0,23 0,21 0,03 2,41 0,01 1,64 0,04 1,81 0,20 0,07 1,14 0,03 1,14
Перед операцией 12 M 2,68 116 0,28 167 4,38 1,49 0,86 58,1 0,76 35,7 0,31 18,3 2,26 0,18 12,2 0,10 5,7
±m 0,21 8,12 0,02 18,4 0,12 0,07 0,07 5,23 0,07 2,14 0,01 1,28 0,27 0,02 0,73 0,01 0,34
p1 x   x x x   x       x x     x x x
Перед химио-терапией 12 M 2,87 102 0,47 164 4,49 1,39 0,89 57,7 0,85 42,7 0,17 15,5 4,89 0,17 12,1 0,06 4,2
±m 0,23 8,16 0,04 13,1 0,36 0,13 0,15 5,19 0,07 2,56 0,01 2,17 0,39 0,02 0,97 0,01 0,34
p1   x x x x   x       x x x     x x
Сроки обсле-
дования после окончания химио-терапии
1 мес. 12 M 2,64 99 0,73 114 2,62 0,92 0,59 55,0 0,60 45,5 0,14 17,8 4,07 0,15 16,1 0,01 0,9
±m 0,21 7,92 0,04 9,1 0,21 0,08 0,10 4,95 0,05 2,73 0,01 2,50 0,33 0,02 1,29 0,00 0,08
p     x x x x     x           x x x
p1 x x x x x x x   x   x x x   x x x
3 мес. 12 M 2,43 107 0,42 148 3,04 1,16 0,69 52,8 0,64 38,5 0,16 23,1 3,91 0,19 16,3 0,02 1,7
±m 0,17 8,56 0,03 10,4 0,24 0,09 0,06 8,98 0,06 3,08 0,01 1,85 0,55 0,02 1,80 0,00 0,18
p         x       x     x     x x x
p1 x x x x x x x   x   x   x   x x x
6 мес. 11* M 2,42 101 0,31 156 3,42 0,92 0,50 44,6 0,60 45,5 0,10 16,8 5,62 0,09 10,2 0,02 2,3
±m 0,19 8,08 0,03 12,5 0,27 0,07 0,04 3,56 0,05 7,74 0,01 1,34 0,34 0,01 1,43 0,00 0,32
p     x   x x x x x   x     x   x x
p1 x x x x x x x x x x x x x     x x

Примечание:
p - достоверность различий по сравнению с начальным уровнем (перед началом химиотерапии);
p1 - достоверность различий по сравнению с группой контроля;
x - коэффициент достоверности p<0,05;
* - один больной умер.

Таблица 2.

Гематологические и иммунологические показатели у больных 2-ой группы, которые прошли хирургическое лечение, химиотерапию и которым была проведена трансплантация ГК ЭПЧ после начала курсов химиотерапии.

Показатели Эритро-
циты
Гемо-
глобин
Рети-
куло-
циты
Тромбо-
циты
Лейко-
циты
Лимфо-
циты
Т- лимфо-
циты, CD3+
Т- хелперы, CD4+ Т- супреc-
соры, CD8+
CD4+/ CD8+ B-лимфо-
циты, CD22+
EK-клетки, CD 16+
  n   1012 г/л % 109 109 109 109 % 109 % 109 %   109 % 109 %
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17
Контроль 11 M 3,54 137 0,83 217 5,42 1,81 1,24 57,8 0,81 40,3 0,52 25,0 1,59 0,23 9,1 0,24 13,9
m 0,32 7,30 0,07 13,1 0,23 0,21 0,03 2,41 0,01 1,64 0,04 1,81 0,20 0,07 1,14 0,03 1,14
Перед операцией 10 M 2,42 121 0,24 151 3,82 1,30 0,75 58,1 0,49 52,5 0,16 17,7 3,01 0,16 13,1 0,11 8,3
±m 0,19 10,89 0,02 13,6 0,31 0,10 0,06 5,23 0,04 4,72 0,03 1,59 0,24 0,01 1,05 0,02 0,67
p1 x   x x x x x   x x x x x   x x x
p2                 x x x   x       x
Перед химио-терапией 10 M 2,57 104 0,53 148 3,97 1,27 0,81 64,1 0,46 47,3 0,14 14,1 2,41 0,15 10,8 0,09 7,4
±m 0,28 8,32 0,04 11,8 0,36 0,22 0,07 5,13 0,04 3,78 0,01 1,13 0,22 0,03 0,97 0,02 0,67
p1 x x x x x   x   x   x x x     x x
p2                 x       x       x
Перед трансплан-тацией 10 M 2,31 96 0,91 118 2,66 0,98 0,46 47,3 0,20 43,9 0,11 19,9 1,75 0,17 16,8 0,06 6,5
±m 0,25 5,76 0,06 13,0 0,16 0,08 0,03 4,25 0,01 2,63 0,01 1,39 0,14 0,01 1,01 0,02 0,39
p1 x x   x x x x x x   x x     x x x
p2     x x x x x   x   x   x   x   x
Сроки обследования после окончания химиотерапии 1 мес. 10 M 3,12 104 3,72 129 4,27 1,62 0,99 61,2 0,56 56,4 0,24 19,7 3,39 0,20 13,7 0,05 2,7
±m 0,48 9,36 0,26 7,7 0,51 0,20 0,11 4,89 0,08 3,39 0,01 1,18 0,20 0,01 0,96 0,01 0,19
p     x               x x x x x x x
p1   x x x x   x   x x x x x   x x x
p2     x   x x x     x x     x   x x
3 мес. 10 M 2,91 109 1,73 155 3,91 1,45 0,87 60,3 0,38 43,9 0,19 18,3 1,91 0,24 16,4 0,11 8,4
±m 0,26 15,26 0,12 17,1 0,24 1,30 0,10 6,63 0,03 3,51 0,01 1,10 0,12 0,01 0,98 0,04 0,50
p     x               x x x x x    
p1     x x x   x   x   x x     x x x
p2     x   x       x   x x x x   x x
6 мес. 9* M 2,95 118 1,04 162 3,56 1,35 0,81 60,3 0,36 43,9 0,20 19,9 1,75 0,19 14,1 0,03 1,8
±m 0,10 6,70 0,07 13,0 0,39 0,11 0,07 4,82 0,03 3,51 0,02 1,39 0,14 0,01 0,85 0,01 0,11
p     x           x   x x x   x x x
p1     x x x   x   x   x x     x x
p2 x   x     x x x x   x   x x x    
9 мес. 8** M 2,85 108 0,78 124 3,09 1,08 0,65 60,3 0,35 54,0 0,12 15,8 2,76 0,15 14,2 0,04 4,4
±m 0,31 12,96 0,06 8,7 0,49 0,12 0,10 6,03 0,04 4,86 0,01 2,05 0,22 0,02 1,99 0,01 0,61
p     x           x             x x
p1       x x x x   x x x x x   x x x

Примечание:
p - достоверность различий по сравнению с начальным уровнем (перед началом химиотерапии);
p1 - достоверность различий по сравнению с группой контроля;
p2 - достоверность различий в сравнении с показателями 1 группы;
x - коэффициент достоверности p<0,05;
* - один больной умер;
** - один больной умер и один не явился на обследование.


Fetal stem cells treatment results depend on: disease's severity, age of the patient, adherence for the medications and regime. Treatment results, presented on this site, are individual for each clinical case.