English
+38 068 889 89 89
00380689869898 (汉语)
00380930552240 (باللغة العربية)
00380930552240 (باللغة العربية)
+38 044 223 28 95
Contact us

Применение гемопоэтических клеток эмбриональной печени человека при лечении больных раком головки поджелудочной железы, осложненным механической желтухой

А.И. Смикодуб
Клиника клеточной терапии
Национального медицинского университета и Центра эмбриональных тканей «ЭмСелл», г. Киев.


Эмбриональные клеточные суспензии, содержащие стволовые клетки, применяются в последние десятилетия в терапии различных заболеваний благодаря своей способности восстанавливать клеточную массу и функциональную активность поврежденной ткани или органа. В качестве источника стволовых клеток гемопоэза используют обычно эмбриональную печень в возрасте 5-8 недель и эмбриональную селезенку 6-8 недель гестации.

Развитие рака головки поджелудочной железы с обструкцией желчных путей сопровождается выраженной депрессией кроветворной функции и иммунитета в результате токсического действия опухоли, интоксикации желчными кислотами, пигментами, а также угнетения функции печени. Частично эти явления уменьшаются в результате проведенного паллиативного хирургического лечения и детоксикационной терапии. При назначении химиотерапии угнетение гемопоэза и факторов иммунитета становится еще более выраженным и сопровождается миелодепрессией в виде глубокой лейкопении, агранулоцитоза, тромбоцитопении, что делает невозможным дальнейшее лечение цитостатическими препаратами. Иммунологическая несостоятельность приводит к развитию инфекционных осложнений. Кроме того, резко ухудшается качество жизни ввиду нарастания явлений интоксикации. Пациенты слабеют, худеют, постоянно находятся в постели, усиливаются явления соматической депрессии.

У нас имеется опыт использования гемопоэтических клеток эмбриональной печени человека (ГК ЭПЧ) в программах лечения онкологических больных на разных этапах развития онкологического процесса. Гемопоэтические клетки помогают провести радикальное лечение опухоли при наличии осложнений в виде анемии, лихорадки, истощения. После проведенных трансплантаций эти явления уменьшаются или исчезают. Эмбриональные клеточные суспензии, содержащие стволовые клетки гемопоэза, позволяют реконструировать гемопоэз после развития цитостатической миелодепрессии в ходе последующих курсов химиотерапии. Наконец, гемопоэтические клетки способны восстановить показатели иммунитета у пациентов, получивших курсы химиотерапии [4].

Уже через 6-8 часов после трансплантации у пациентов наблюдается синдром раннего посттрансплантационного улучшения в виде уменьшения слабости, снижения температуры, улучшения аппетита, повышения физической и умственной активности, изменения психофункционального статуса [3].

Материалы и методы. Эмбрионы 5-8 недель гестации получали в ходе медицинских абортов по социальным показаниям от здоровых женщин, предварительно обследованных на наличие вирусных и гемических инфекций. Клеточные суспензии из эмбриональной печени готовили в стерильных условиях бокса по стандартной методике, включающей следующие этапы: выделение эмбриональной печени, гомогенизация, фильтрация через фильтры для переливания крови и иглы уменьшающегося диаметра. Контейнеры с суспензией замораживали по программе и хранили при температуре -196°С.

Пренатальная диагностика включала в себя исследования на наличие сифилиса, ВИЧ-инфекции, вирусного гепатита В и С. Проводили исследования содержимого контейнеров на бактериальную стерильность. Фетальная диагностика включала исследования на наличие ВИЧ-инфекции, вирусного гепатита В и С, цитомегаловируса, вируса краснухи, герпеса и токсоплазмоза. Кровь доноров исследовалась также на ВИЧ-инфекцию через 90 дней после прерывания беременности.Ґ

Для трансплантации отбирали клеточные суспензии 5-8 недель гестации, с количеством клеток от 5 до 90?106 в 1 мл, в объеме от 1 до 4,5 мл. Клеточную суспензию размораживали по программе и вводили внутривенно капельно [1].

Исследование субпопуляционного состава иммунокомпетентных клеток проводились при помощи непрямого иммунофлюоресцентного теста с панелями моноклональных антител серии Ley (Becton Dickinson, США), выявляющих поверхностные антигены кластеров CD3, CD4, CD8, CD16 и CD22. Исследования проводили на лазерном проточном цитофлюориметре Facstar Plus (Becton Dickinson, США). Обработка данных проводилась по программе «Facstar Plus».

Под наблюдением находилось 22 больных с раком головки поджелудочной железы, осложненным механической желтухой, которым была проведена операция билиодигестивного шунтирования с целью устранения холестаза. Средний возраст оперированных больных составил 65,1±3,3 года. Мужчин среди страдавших раком головки поджелудочной железы было в 1,8 раза больше, чем женщин. В первую группу вошли 12 пациентов с раком головки поджелудочной железы, после паллиативного хирургического лечения через 9-17 дней получивших базисную химиотерапию 5-фторурацилом и адриобластином. Во вторую группу вошли 10 пациентов, которым после хирургического лечения и курса химиотерапии через 8-14 дней была проведена трансплантация ГК ЭПЧ ввиду снижения одного из показателей периферической крови: лейкоцитов менее 4,0 Г/л, эритроцитов менее 3,0 Т/л, тромбоцитов менее 180 Г/л.

В качестве контрольных показателей использовались данные обследования группы из 11 грыженосителей в возрасте 57-69 лет.

Результаты и их обсуждение.
Перед операцией в 1-ой и 2-ой группе больных наблюдали достоверное снижение по сравнению с контрольной группой следующих показателей (табл. 1 и 2, рис. 1): эритроцитов на 26% и 32%, гемоглобина на 15% и 12%, лейкоцитов на 19% и 30%, тромбоцитов на 23% и 30%, общего числа лимфоцитов на 18% (p>0,05) и 28%, Т-лимфоцитов (CD3+) на 31% и 40%, Т-хелперов (CD4+) на 6% (p>0,05) и 40%, Т-супрессоров (CD8+) на 40% и 69%, ЕК-клетки (CD16+) на 58% и 54%, соответственно. Иммунорегуляторный индекс после операции у пациентов 2 группы возрос до 3,01±0,24 (в 1,9 раза).
После операции постоянно проводилась терапия, направленная на уменьшение явлений воспаления, интоксикации, восстановления функции печени и желчевыводящих путей. У пациентов уменьшились явления желтушного синдрома и печеночно-клеточной недостаточности, исчезли признаки холемического синдрома.

Перед проведением курса химиотерапи в обеих группах отмечено статистически достоверное снижение эритроцитов в 1-ой группе на 19%, во 2-ой - на 27%, гемоглобина - соответственно на 26% и 24%, лейкоцитов - на 17% и 27%, тромбоцитов - на 24% и 32%, лимфоцитов - на 23% и 30%, Т-лимфоцитов - на 28% и 35%, Т-хелперов (CD4+) на 16% и 43%, Т-супрессоров (CD8+) в 3 раза и 3,7 раза соответственно. Таким образом, перед проведением курса химиотерапии основные показатели периферической крови и иммунологического статуса возросли на 10-20% кроме субпопуляции Т-супрессоров.

Пациенты обеих групп получили базисное химиотерапевтическое лечение 5-фторурацилом, внутривенно по 15 мг/кг массы тела до суммарной дозы 4,0 грамма и адриобластином, внутривенно по 50 мг/м2 поверхности тела в первый день каждого курса лечения. И в 1-ой и во 2-ой группах показатели периферической крови и клеточного иммунитета снизились в пределах от 10% до 40%. Так, например, количество лейкоцитов составило в 1-ой группе 2,84±0,24 Г/л, во 2-ой группе - 2,66±0,65 Г/л, эритроцитов - в 1-ой группе - 2,7±0,28 Т/л, во 2-ой - 2,31±0,25 Т/л, тромбоцитов в 1-ой группе 134,2±11,1 Г/л, во 2-ой группе - 118,1±12,9 Г/л. Продолжение курсов химиотерапии стало невозможным ввиду явлений цитостатической депрессии. 10 больным была проведена трансплантация ГК ЭПЧ.

В дальнейшем анализировались показатели периферической крови и иммунологического статуса через 1, 3, 6 и 9 месяцев после проведения первого курса химиотерапии. Пациентам 1-ой группы курсы химиотерапии более не проводились (наблюдения 1993-2001 г.). Пациентам 2-ой группы были проведены повторные курсы химиотерапии от 2 до 4 (наблюдения 1998-2001 г.).

Через 1 месяц у пациентов 2-ой группы количество лейкоцитов было выше на 63%, эритроцитов - на 18%, тромбоцитов - на 13%, общее количество лимфоцитов - на 77%, количество лимфоцитов CD3+ на 69%, лимфоцитов CD4+ - уменьшилось на 5%, CD8+ - возросло на 67%, CD22+ - на 33%, ЕК-клеток - в 5,4 раза по сравнению с аналогичными показателями у пациентов в 1-й группе.

Через 3 месяца, несмотря на проведение последующего курса химиотерапии, у больных 2-й группы определяемые показатели оказались выше по сравнению с аналогичными в 1-ой группе: лейкоцитов было на 29% выше, эритроцитов - на 20%, тромбоцитов - на 5%, общее количество лимфоцитов - на 25%, количество лимфоцитов CD3+ - на 25%, лимфоцитов CD4+ - меньше на 40%, количество CD8+ - возросло на 21%, CD22+ - на 28%, ЕК-клеток стало в 4 раза больше по сравнению с аналогичными показателями у пациентов в 1-й группе

Через 6 месяцев тенденция более высоких показателей красной и белой крови, тромбоцитов и показателей иммунитета сохранилась у больных, получивших трансплантацию ГК ЭПЧ. Эти показатели были настолько стабильные, что удалось провести третий курс химиотерапии.

Продолжительность жизни пациентов 1-ой группы составила 6,9±0,52 месяцев, поэтому в срок 9 месяцев оценивались показатели только у больных 2-ой группы. У них наблюдали лейкопению (3,09±0,49 Г/л), анемию средней степени тяжести (эритроциты 2,85±0,31 Т/л, гемоглобин 108,1±13 г/л), тромбоцитопению (124±8,7 Г/л), лимфопению (1,08±0,12 Г/л), снижение субпопуляций лимфоцитов CD3+, CD4+, CD8+, CD22+, CD16+ до крайне низких показателей. Продолжительность жизни пациентов 2-ой группы составила 10,1±0,56 мес.

Выводы:
  1. Трансплантация ГК ЭПЧ при лечении больных раком головки поджелудочной железы, осложненным механической желтухой, позволяет частично восстановить показатели периферической крови: лейкоциты, эритроциты, тромбоциты. Кроме этого, улучшаются показатели клеточного иммунитета, возрастает общее количество лимфоцитов, а также их субпопуляций (CD3+, CD4+, CD8+, CD16+), нормализуется иммунорегуляторный индекс.
  2. Применение ГК ЭПЧ позволяет провести планируемые курсы химиотерапии в полном объеме, что связано с появлением резистентности костного мозга к цитостатическим препаратам после введения эмбриональных стволовых клеток.
  3. Применение ГК ЭПЧ в комплексном лечении больных раком головки поджелудочной железы, осложненным механической желтухой, включающем паллиативную операцию и курсы химиотерапии позволяет увеличить продолжительность жизни почти в 1,5 раза.

Таблица 1.

Гематологические и иммунологические показатели у больных 1-ой группы, которые прошли хирургическое лечение и химиотерапию.

Показатели Эритро-
циты
Гемо-
глобин
Рети-
куло-
циты
Тромбо-
циты
Лейко-
циты
Лимфо-
циты
Т-лимфо-
циты, CD3+
Т-хелперы, CD4+ Т-супрес-
соры, CD8+
CD4+/ CD8+ B-лимфо-
циты, CD22+
EK-клетки, CD 16+
  n   1012 г/л % 109 109 109 109 % 109 % 109 %   109 % 109 %
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17
Контроль 11 M 3,54 137 0,83 217 5,42 1,81 1,24 57,8 0,81 40,3 0,52 25,0 1,59 0,23 9,1 0,24 13,9
±m 0,32 7,30 0,07 13,1 0,23 0,21 0,03 2,41 0,01 1,64 0,04 1,81 0,20 0,07 1,14 0,03 1,14
Перед операцией 12 M 2,68 116 0,28 167 4,38 1,49 0,86 58,1 0,76 35,7 0,31 18,3 2,26 0,18 12,2 0,10 5,7
±m 0,21 8,12 0,02 18,4 0,12 0,07 0,07 5,23 0,07 2,14 0,01 1,28 0,27 0,02 0,73 0,01 0,34
p1 x   x x x   x       x x     x x x
Перед химио-терапией 12 M 2,87 102 0,47 164 4,49 1,39 0,89 57,7 0,85 42,7 0,17 15,5 4,89 0,17 12,1 0,06 4,2
±m 0,23 8,16 0,04 13,1 0,36 0,13 0,15 5,19 0,07 2,56 0,01 2,17 0,39 0,02 0,97 0,01 0,34
p1   x x x x   x       x x x     x x
Сроки обсле-
дования после окончания химио-терапии
1 мес. 12 M 2,64 99 0,73 114 2,62 0,92 0,59 55,0 0,60 45,5 0,14 17,8 4,07 0,15 16,1 0,01 0,9
±m 0,21 7,92 0,04 9,1 0,21 0,08 0,10 4,95 0,05 2,73 0,01 2,50 0,33 0,02 1,29 0,00 0,08
p     x x x x     x           x x x
p1 x x x x x x x   x   x x x   x x x
3 мес. 12 M 2,43 107 0,42 148 3,04 1,16 0,69 52,8 0,64 38,5 0,16 23,1 3,91 0,19 16,3 0,02 1,7
±m 0,17 8,56 0,03 10,4 0,24 0,09 0,06 8,98 0,06 3,08 0,01 1,85 0,55 0,02 1,80 0,00 0,18
p         x       x     x     x x x
p1 x x x x x x x   x   x   x   x x x
6 мес. 11* M 2,42 101 0,31 156 3,42 0,92 0,50 44,6 0,60 45,5 0,10 16,8 5,62 0,09 10,2 0,02 2,3
±m 0,19 8,08 0,03 12,5 0,27 0,07 0,04 3,56 0,05 7,74 0,01 1,34 0,34 0,01 1,43 0,00 0,32
p     x   x x x x x   x     x   x x
p1 x x x x x x x x x x x x x     x x

Примечание:
p - достоверность различий по сравнению с начальным уровнем (перед началом химиотерапии);
p1 - достоверность различий по сравнению с группой контроля;
x - коэффициент достоверности p<0,05;
* - один больной умер.

Таблица 2.

Гематологические и иммунологические показатели у больных 2-ой группы, которые прошли хирургическое лечение, химиотерапию и которым была проведена трансплантация ГК ЭПЧ после начала курсов химиотерапии.

Показатели Эритро-
циты
Гемо-
глобин
Рети-
куло-
циты
Тромбо-
циты
Лейко-
циты
Лимфо-
циты
Т- лимфо-
циты, CD3+
Т- хелперы, CD4+ Т- супреc-
соры, CD8+
CD4+/ CD8+ B-лимфо-
циты, CD22+
EK-клетки, CD 16+
  n   1012 г/л % 109 109 109 109 % 109 % 109 %   109 % 109 %
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17
Контроль 11 M 3,54 137 0,83 217 5,42 1,81 1,24 57,8 0,81 40,3 0,52 25,0 1,59 0,23 9,1 0,24 13,9
m 0,32 7,30 0,07 13,1 0,23 0,21 0,03 2,41 0,01 1,64 0,04 1,81 0,20 0,07 1,14 0,03 1,14
Перед операцией 10 M 2,42 121 0,24 151 3,82 1,30 0,75 58,1 0,49 52,5 0,16 17,7 3,01 0,16 13,1 0,11 8,3
±m 0,19 10,89 0,02 13,6 0,31 0,10 0,06 5,23 0,04 4,72 0,03 1,59 0,24 0,01 1,05 0,02 0,67
p1 x   x x x x x   x x x x x   x x x
p2                 x x x   x       x
Перед химио-терапией 10 M 2,57 104 0,53 148 3,97 1,27 0,81 64,1 0,46 47,3 0,14 14,1 2,41 0,15 10,8 0,09 7,4
±m 0,28 8,32 0,04 11,8 0,36 0,22 0,07 5,13 0,04 3,78 0,01 1,13 0,22 0,03 0,97 0,02 0,67
p1 x x x x x   x   x   x x x     x x
p2                 x       x       x
Перед трансплан-тацией 10 M 2,31 96 0,91 118 2,66 0,98 0,46 47,3 0,20 43,9 0,11 19,9 1,75 0,17 16,8 0,06 6,5
±m 0,25 5,76 0,06 13,0 0,16 0,08 0,03 4,25 0,01 2,63 0,01 1,39 0,14 0,01 1,01 0,02 0,39
p1 x x   x x x x x x   x x     x x x
p2     x x x x x   x   x   x   x   x
Сроки обследования после окончания химиотерапии 1 мес. 10 M 3,12 104 3,72 129 4,27 1,62 0,99 61,2 0,56 56,4 0,24 19,7 3,39 0,20 13,7 0,05 2,7
±m 0,48 9,36 0,26 7,7 0,51 0,20 0,11 4,89 0,08 3,39 0,01 1,18 0,20 0,01 0,96 0,01 0,19
p     x               x x x x x x x
p1   x x x x   x   x x x x x   x x x
p2     x   x x x     x x     x   x x
3 мес. 10 M 2,91 109 1,73 155 3,91 1,45 0,87 60,3 0,38 43,9 0,19 18,3 1,91 0,24 16,4 0,11 8,4
±m 0,26 15,26 0,12 17,1 0,24 1,30 0,10 6,63 0,03 3,51 0,01 1,10 0,12 0,01 0,98 0,04 0,50
p     x               x x x x x    
p1     x x x   x   x   x x     x x x
p2     x   x       x   x x x x   x x
6 мес. 9* M 2,95 118 1,04 162 3,56 1,35 0,81 60,3 0,36 43,9 0,20 19,9 1,75 0,19 14,1 0,03 1,8
±m 0,10 6,70 0,07 13,0 0,39 0,11 0,07 4,82 0,03 3,51 0,02 1,39 0,14 0,01 0,85 0,01 0,11
p     x           x   x x x   x x x
p1     x x x   x   x   x x     x x
p2 x   x     x x x x   x   x x x    
9 мес. 8** M 2,85 108 0,78 124 3,09 1,08 0,65 60,3 0,35 54,0 0,12 15,8 2,76 0,15 14,2 0,04 4,4
±m 0,31 12,96 0,06 8,7 0,49 0,12 0,10 6,03 0,04 4,86 0,01 2,05 0,22 0,02 1,99 0,01 0,61
p     x           x             x x
p1       x x x x   x x x x x   x x x

Примечание:
p - достоверность различий по сравнению с начальным уровнем (перед началом химиотерапии);
p1 - достоверность различий по сравнению с группой контроля;
p2 - достоверность различий в сравнении с показателями 1 группы;
x - коэффициент достоверности p<0,05;
* - один больной умер;
** - один больной умер и один не явился на обследование.


Fetal stem cells treatment results depend on: disease's severity, age of the patient, adherence for the medications and regime. Treatment results, presented on this site, are individual for each clinical case.